基因工程載體分析報(bào)告范本
摘要：
基因工程已經(jīng)成為生物科學(xué)中不可或缺的一部分.也是最令人類充滿無限遐想的一門科學(xué).自從解開人類基因組后,長生不老等就古老的傳說又再度流行起來.盡管現(xiàn)在的基因技術(shù)還不能做到讓你真的長生不老,但是基因療法等技術(shù)的出現(xiàn)已經(jīng)讓人們看到了基因工程的生命力�；蚬こ淌侵冈隗w外將核酸分子插入病毒、質(zhì)�；蚱渌d體分子，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合，并使之參入到原先沒有這類分子的寄主細(xì)胞內(nèi)，而能持續(xù)穩(wěn)定地繁殖�；蜉d體是作為基因?qū)爰?xì)胞的工具。猶如火箭能把衛(wèi)星射向九天一樣，基因載體可以把目的基因送入靶細(xì)胞內(nèi)，從而發(fā)揮目的基因的特定功能。
關(guān)鍵詞：基因、載體、運(yùn)載、自主復(fù)制、表達(dá)
正文：
載體是指運(yùn)載外源DNA有效的進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)的工具。載體同外源DNA在體外重組成DNA重組分子，在進(jìn)入受體后形成一個(gè)復(fù)制子，即形成在細(xì)胞內(nèi)能獨(dú)自進(jìn)行自我復(fù)制的遺傳因子。
1. 基因載體是把基因?qū)爰?xì)胞的工具，他的作用是①運(yùn)載目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞，②使之能得到復(fù)制和進(jìn)行表達(dá)。
2. 基因載體的分類：
根據(jù)來源：質(zhì)粒載體、噬菌體載體、病毒載體
根據(jù)用途：克隆載體、表達(dá)載體
根據(jù)性質(zhì)：溫度敏感型載體，融合型表達(dá)載體、非融合型表達(dá)載體。 作為載體必須滿足的條件：①有多種限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn)，但每一種酶最好只有一個(gè)切點(diǎn)；②外源DNA插入以后載體在受體細(xì)胞中自我復(fù)制；③有便于選擇的標(biāo)記基因；④具有促進(jìn)外源DNA表達(dá)的調(diào)控區(qū)。
一、 質(zhì)粒載體
質(zhì)粒是在許多種細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的染色體外的遺傳因子。它是閉合環(huán)狀雙鏈DNA分子，大小1kb到200kb不等。能自主復(fù)制，但要利用寄主細(xì)胞復(fù)制染色體的同一組酶系。有某些基因，如抗藥性基因，對寄主的生長是有利的。
質(zhì)粒的復(fù)制分松弛型和嚴(yán)謹(jǐn)型兩種。松弛型質(zhì)粒是指質(zhì)粒的復(fù)制跟細(xì)菌染色體的復(fù)制不同步，一般在一個(gè)菌體內(nèi)能復(fù)制10-200 拷貝；嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒是指質(zhì)粒復(fù)制跟細(xì)菌染色體同步，一般含有1-10 拷貝。
1、質(zhì)粒的基本特性
�。�1）．質(zhì)粒的復(fù)制
通常一個(gè)質(zhì)粒含有一個(gè)與相應(yīng)的`順式作用控制要素結(jié)合在一起的復(fù)制起始區(qū)（整個(gè)遺傳單位定義為復(fù)制子）。在不同的質(zhì)粒中，復(fù)制起始區(qū)的組成方式是不同的，有的可決定復(fù)制的方式，如滾環(huán)復(fù)制和 θ 復(fù)制。在大腸桿菌中使用的大多數(shù)載體都帶有一個(gè)來源于 pMB1 質(zhì)�；� ColE1 質(zhì)粒的復(fù)制起始位點(diǎn)。
（2）．質(zhì)粒的拷貝數(shù)
質(zhì)�？截悢�(shù)分為嚴(yán)謹(jǐn)型與松馳型。嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)有限，大約 1 ～幾個(gè)；松馳型質(zhì)粒拷貝數(shù)較多，可達(dá)幾百。
�。�3）．質(zhì)粒的不相容性
兩個(gè)質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性，它是指在第二個(gè)質(zhì)粒導(dǎo)入后，在不涉及 DNA 限制系統(tǒng)時(shí)出現(xiàn)的現(xiàn)象。不相容的質(zhì)粒一般都利用同一復(fù)制系統(tǒng)，從而導(dǎo)致不能共存于同一宿主中。兩個(gè)不相容性質(zhì)粒在同一個(gè)細(xì)胞中復(fù)制時(shí)，在分配到子細(xì)胞的過程中會競爭，隨機(jī)挑選，微小的差異最終被放大，從而導(dǎo)致在子細(xì)胞中只含有其中一種質(zhì)粒。
�。�4）．轉(zhuǎn)移性
質(zhì)粒具轉(zhuǎn)移性。它是指在自然條件下，很多質(zhì)粒可以通過稱為細(xì)菌接合的作用轉(zhuǎn)移到新宿主內(nèi)。它需要移動基因 mob ，轉(zhuǎn)移基因 tra ，順式因子 bom 及其內(nèi)部的轉(zhuǎn)移缺口位點(diǎn) nic。
2、質(zhì)粒DNA的制備與注意事項(xiàng)：
細(xì)菌的培養(yǎng)：從瓊脂平板上挑取單菌落接入5ml含適合抗生素的LB培養(yǎng)基中，于37℃搖床中振蕩培養(yǎng)過夜。
保種：取80%滅菌甘油300ul加入1ml菌種中冷凍保存。
質(zhì)粒提取：
�。�1）1.5ml過夜培養(yǎng)物倒入EP管，5000rpm/10min，棄上清。
�。�2）加入150ul冰預(yù)冷的solutionⅠ，vortex，使菌分散重懸。
�。�3）加入300ul solutionⅡ，來回顛倒4-6次，冰上≤5min。
（4）加入225ul solutionⅢ，來回顛倒4-6次，冰上≥5min。
（5）6000rpm/15min（或12000rpm/5min）。
�。�6）吸上清移入新EP管，等體積酚/氯仿抽提一次，vortex，12000rpm/15min。
�。�7）吸上清移入新EP管，等體積氯仿抽提，vortex，12000rpm/5min。
�。�8）重復(fù)步驟7）1-2次。
�。�9）吸上清移入新EP管，0.7倍體積異丙醇沉淀，vortex，12000rpm/15min。
�。�10）棄上清，1ml70%酒精洗滌1-2次，12000rpm/5min。
�。�11）棄上清，空氣中干燥。
�。�12）加入10-20ul滅菌ddH2O溶解。