環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�。�1）了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及原理，掌握顯微鏡的操作及保養(yǎng)方法。（2）觀察、識(shí)別幾種原核微生物。真核微生物的個(gè)體形態(tài)，學(xué)會(huì)生物圖的繪制。
二、實(shí)驗(yàn)器皿與材料
（1）器皿：顯微鏡、擦鏡紙、二甲苯。
（2）材料：示范片：細(xì)菌三形（球狀、桿狀、螺旋狀）、弧狀（硫酸鹽還原菌）、絲狀（浮游球衣菌等）、細(xì)菌鞭毛及細(xì)菌莢膜。放線菌、顫藍(lán)細(xì)菌、微囊藍(lán)細(xì)菌或念珠藍(lán)細(xì)菌等。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
�。�1）將標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，使觀察的目的物置于圓孔正中央。（2）將鏡頭換成低倍鏡，將粗調(diào)節(jié)器向下旋轉(zhuǎn)（或載物臺(tái)向上旋轉(zhuǎn)），眼睛注視物鏡。當(dāng)物鏡的尖端距離載玻片約0.5cm處時(shí)停止旋轉(zhuǎn)。
�。�3）左眼對著目鏡觀察，將粗調(diào)節(jié)器向上旋轉(zhuǎn)，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)，直至目的物清晰。此時(shí)找到目的物并移至中央。（4）換成高倍鏡，觀察目的物，旋轉(zhuǎn)細(xì)調(diào)節(jié)鈕，直至視野清晰。（5）觀察示范片，繪出其形態(tài)圖。
四、思考題
�。�1）使用油鏡時(shí)，為什么要先用低倍鏡觀察？答：為了找到目的物并移動(dòng)到中央。
�。�2）要使視野明亮，除采用光源外，還可采取哪些措施？
答：調(diào)大孔徑光闌，調(diào)整光源。如果是用反光鏡的顯微鏡，用凹面鏡可使視野明亮。
五、生物圖
實(shí)驗(yàn)二、微生物培養(yǎng)基的配制與滅菌
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�。�1）熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準(zhǔn)備工作。
�。�2）了解配置微生物培養(yǎng)基的基本原理，掌握配置、分裝培養(yǎng)基的方法。（3）學(xué)會(huì)各類物品的'包裝、配置（稀釋水等）和滅菌技術(shù)。
二、實(shí)驗(yàn)器皿與材料
�。�1）實(shí)驗(yàn)器皿：高壓蒸汽滅菌器、干燥箱、煤氣燈、培養(yǎng)皿、試管、刻度移液管、錐形瓶、燒杯、兩桶、藥物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉網(wǎng)、藥匙、鐵架、表面皿、pH試紙和棉花等。
（2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和瓊脂等。
三、實(shí)驗(yàn)原理
培養(yǎng)基是微生物生長的基質(zhì)，是按照微生物營養(yǎng)、生長繁殖的需要，由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵及微量元素和水，按一定的體積分?jǐn)?shù)配置而成。調(diào)整合適的pH，經(jīng)高溫滅菌后以備培養(yǎng)微生物之用。由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而培養(yǎng)基種類也多，它們的配方及配制方法也各有差異，但一般的配制過程大致相同。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、取100mL蒸餾水倒入錐形瓶；
2、稱取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，瓊脂20g；3、用100g/LNaOH調(diào)節(jié)pH至7.2~7.4；4、蓋上棉塞，121℃下滅菌15~20min。
五、思考題
1、固體培養(yǎng)基加瓊脂后加熱溶化時(shí)要注意哪些問題？答：（1）加熱器功率不能太高，也不能太低。太高，容易沸騰和把培養(yǎng)基燒
焦；太低，培養(yǎng)基容易凝固。
�。�2）受熱要均勻，可以墊上石棉網(wǎng)，要用玻璃棒不停緩慢攪拌。
�。�3）加熱完畢后，要在合適的溫度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培養(yǎng)基中加瓊脂的作用是什么？答：瓊脂的作用就是讓培養(yǎng)基凝固。3、如何檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹底？
答：將滅菌后的培養(yǎng)基按滅菌鍋內(nèi)不同位置,每處抽取數(shù)管標(biāo)號(hào),置25至30
攝氏度培養(yǎng)一周左右進(jìn)行檢查,若培養(yǎng)基無什么變化說明滅菌效果較好
實(shí)驗(yàn)三、細(xì)菌的革蘭氏染色
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
（1）了解細(xì)菌的涂片及染色在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的重要性。
（2）學(xué)會(huì)細(xì)菌染色的基本操作技術(shù)，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。
二、染色原理
微生物細(xì)胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其他化合物組成。所以，微生物表現(xiàn)出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。兩性電解質(zhì)兼有堿性基和酸性基，在酸性溶液中解離出堿性基，呈堿性帶正電；在堿性溶液中解離出酸性基，呈酸性帶負(fù)電。經(jīng)測定，細(xì)菌等電點(diǎn)（pI）在2~5之間時(shí)，大多以兩性離子存在，當(dāng)細(xì)菌在中性、堿性或偏酸性溶液中時(shí)，細(xì)菌帶負(fù)電荷，所以容易與帶正電荷的堿性染料結(jié)合，故用堿性染料染色的為多。
微生物體內(nèi)各結(jié)構(gòu)與染料結(jié)合力不同，故可用各染料分別染微生物的各結(jié)構(gòu)以便觀察。
三、實(shí)驗(yàn)器皿、試劑、材料
�。�1）器皿：顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。
�。�2）試劑：草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇、質(zhì)量濃度為5g/L的沙黃染色液等。
�。�3）材料：枯草桿菌、大腸桿菌。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
（1）涂片：載玻片滴一滴蒸餾水蘸菌染勻（2）初染：用草酸銨結(jié)晶紫染液染色1~2min后水洗（3）媒染：用革蘭氏碘液染色1~2min后水洗
�。�4）脫色：滴加體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，約45s后水洗（5）復(fù)染：滴加番紅染色2~3min后水洗并干燥（6）鏡檢：用顯微鏡觀察菌體形態(tài)
五、思考題
�。�1）要得到正確的革蘭氏染色結(jié)果必須注意哪些操作？關(guān)鍵在哪幾步？為什么？
答：應(yīng)注意干燥時(shí)不要用火燒太久。關(guān)鍵在于涂片，涂片的時(shí)候要注意涂均勻，并且兩個(gè)菌的量也要差不多，否則太厚的地方脫色就不均勻了。
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